Seminarski rad-Kapilarna elektroforeza

[Harry]

 BIOANALITICKE METODE

    *
      Hemijske metode
    *
      Hromatografske metode
    *
      Masena spektrofotometrija
    *
      Metode sa izotopima
    *
      Spektrometrijske, fluorimetrijske, polarografske metode
    *
      Kapilarna elektroforeza (CE)
    *
   
    *
      U opstem smislu, elektroforeza je metoda razdvajanja naelektrisanih supstanci prema brzinama kretanja u elektricnom polju.
    *
      Krajem 20-ih godina XX veka
    *
      Arne Tiselius 1930.god je doktorirao sa tezom “TEHNIKA POKRETNIH GRANICA U PROUCAVANJU ELEKTROFOREZE PROTEINA”.
    *
      1936.god Tiselius se vraca razvijanju tehnike elektroforetskih razdvajanja I ispitivanjima mogucnosti upotrebe fizickih metoda za resavanje problema u biohemiji.
    *
      1937.god objavio je rad na temu razdvajanja serumskih proteina znatno usavrsenom tehnikom elektroforeze.
    *
      Sa saradnicima je nastavio rad na elektroforetskim razdvajanjima I odredjivanjima , za sta je
    *
      1948. god dobio Nobelovu nagradu za hemiju
KAPILARNA ELEKTROFOREZA (CE)

    *
      Izvodi se u kapilarama (najcesce fused silica) ciji je unutrasnji precnik najcesce 25-75 μm (mogu biti u opsegu od 5-100μm)
    *
      U elektricnom polju cija jacina moze ici I do 700V/cm uz odgovarajuci pufer I nacin detekcije
Vreme migracije jedinjenja koje se ispituje, analita (t) je:

    *
      t= L2/μU
    *
      Gde je t vreme migracije analita,
    *
      L-duzina kapilare
    *
      μ-elektroforetska pokretljivost analita
    *
      U-napon
    *
      Iz ove jednacine se vidi da je vreme zadrzavanja tj migracije analita utoliko krace ukoliko se primenjuje visi napon u sto kracoj kapilari.
Ogranicenja

    *
      -Zagrevanjem medijuma usled protoka struje
    *
      -Jacina primenjenog elektricnog polja odredjuje efikasnost razdvajanja, ali I promenu temperature medijuma (pa se u klasicnoj elektroforezi ne mogu koristiti elektricna polja jaca od 100V/cm)
    *
      -Elektrooosmoza
    *
      -Disperzija (sirenje) zona razdvajanja
    *
      -Svi ovi faktori direktno zavise od osobina uzorka (Mr, pKa, strukture, obrazovanja kompleksa) I instrumenta kojim se odredjivanje izvodi ( duzina kapilare, jacina primenjenog el. polja)
    *
      Idejom da se elektroforeza izvodi u kapilarnim kolonama I konstrukcijom prvog komercijalnog aparata za “mikro” elektroforezu 80-ih godina XX veka kapilarna elektroforeza postaje jedna od vodecih metoda na polju analitickih razdvajanja I odredjivanja.
Prednosti kapilarne elektroforeze

    *
      Efikasnost
    *
      Brzina I jednostavnost u podesavanju selektivnosti
    *
      Ova tehnika pokazuje dobro razdvajanje analiziranih jedinjenja sa mogucnoscu razdvajanja I enantiomera.
    *
      Moc razdvajanja je mnogo veca I od HPLCa
Primena kapilarne elektroforeze:

    *
      CE se koristi za razdvajanje I odredjivanje velikog broja bioloskih molekula kao sto su aminokiseline, peptidi, proteini, fragmenti DNK, nukleinske kiseline kao I pojedinih malih molekula kao sto su lekovi ili cak metalni joni.
    *
      Primeri lekova koji se mogu odrediti na ovaj nacin su morfin, kodein, heroin, amfetamin, kofein, naproksen, izoproterenol.